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氨基柱測蔗糖是正向還是反向系統(tǒng)

更新時間:2022-08-29      點擊次數(shù):1947

氨基柱既可以正相使用,也可以反相使用,但是要注意到的是:正相溶劑和反相溶劑往往是不互溶的,正常情況新氨基柱保存在正相環(huán)境中,例如LUNA 氨基柱保存在正己烷-乙腈(99:1)中,但也有例外,像安捷倫的氨基柱保長期保存要保存在純乙腈中,具體哪個廠家的柱子的保存方法要看柱子的說明書,根據(jù)要求來保存。說一下氨基柱的使用注意事項。
1. 正相使用
1.1 新柱子可直接用流動相。推薦先用正己烷-乙腈(99:1)以0.5ml/min的流速沖10倍柱體積,再根據(jù)流動相選用極性相近的氯仿或二氯甲烷以相同的流速沖10倍柱體積,最后換成流動相。
1.1 正相使用時,不宜分析含醛基、羰基的化合物,不可用于還原糖的分析;流動相要*脫氣,并不得含有羰基化合物和過氧化物(質(zhì)量不好的乙mi、四氫呋喃含有少量)。
1.3 任何時候更換流動相時都要確保新流動相與柱子原保存液可互溶。
2 反相使用
2.1 先用正己烷-乙腈(99:1)以0.5ml/min的流速沖10倍柱體積,再依次以相同的流速相同的用量用氯仿、異丙醇、甲醇、甲醇-水(50:50)沖柱子。
2.2 以0.5ml/min的流速用30倍柱體積的pH11.0的氫氧化鈉水溶液沖柱子(注意pH值切不可超過11.0),立即用水( 0.5ml/min的流速,30倍柱體積)沖洗,再換成流動相。
2.3 配制流動相時,應(yīng)各組分分別量取,比例較小的組分要精密量取,需調(diào)pH值時要精密到0.1。
2.4 反相條件下使用時,要特別注意控制pH值范圍,pH值越低越有發(fā)生水解的危險,流動相中水的比例越高當(dāng)然也越有發(fā)生水解的危險。理想的pH范圍在pH 3.0-7.0
2.5 如果要使用的流動相中還含有緩沖鹽類,建議在用分析流動相之前,先用不含緩沖鹽的同比例流動相過渡,這樣可避免緩沖鹽在分析柱內(nèi)的析出。
2.6 有一種情況是,當(dāng)使用氨基柱進(jìn)行酸性物質(zhì)的分析時,酸性物質(zhì)的存在意味著質(zhì)子的存在,可能會使略帶負(fù)電荷的氨基官能團(tuán)質(zhì)子化,導(dǎo)致使用一段時間后對于某些類的分析物保留性質(zhì)有所改變或表現(xiàn)在柱效下降。建議:用5-10倍的柱體積的含0.5-1.0%NH3的乙腈-水(50:50)溶液沖洗該柱(沖洗后當(dāng)然要再用不含堿的流動相洗去多余氨),之后再進(jìn)行分析這類酸性分析物時建議在流動相中略微添加少許氨如0.1%。
3 色譜柱的沖洗:簡單說起來,正相條件下使用的氨基柱就參照硅膠柱的清洗方法;反相條件下使用的氨基柱就參照C18的清洗方法。
4 色譜柱的保存
4.1 正相使用時,將柱子沖洗干凈后,用正己烷-乙腈(99:1)保存。
4.2 反相使用時,如短期不用,可用甲醇或乙腈保存;長期不用時需將甲醇依次用異丙醇、氯仿置換,最后用正己烷保存。
5 色譜柱的再生
5.1 方案1:依次用甲醇、異丙醇、氯仿、正己烷、氯仿、異丙醇、甲醇沖柱子(各以 0.5ml/min的流速,20倍柱體積),再換流動相。這些清洗方法,主要是針對當(dāng)樣品中有雜質(zhì)逐步吸附累積到填料上時的處理方法,色譜柱表現(xiàn)行為為諸如柱壓增高柱效降低等。
5.2 方案2:NH2柱用于反相條件時,NH2鍵會水解,尤其是在該柱子pH范圍以外,在極酸性和堿性條件下柱壽命會下降很快,如果在這個條件下使用需要清洗一下,需要用10倍柱體積溶液沖洗,如下:
95%水/5%乙腈
THF四氫呋喃
95%乙腈/5%水
并保持95%乙腈/5%水繼續(xù)沖洗,以低流速0.2-0.5mL/min過夜沖洗。
5.3 方案3:柱子使用一定時間后,柱效下降,老化,也可清洗一下柱子恢復(fù)柱性能,清洗時依次用10倍柱體積的下列溶液沖洗:
95%水/5%乙腈
THF四氫呋喃
95%乙腈/5%水
再走流動相即可

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