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液相色譜柱的使用

更新時(shí)間:2018-03-09      點(diǎn)擊次數(shù):3691
  液相色譜柱在使用前,進(jìn)行柱的性能測(cè)試,并將結(jié)果保存起來(lái),作為今后評(píng)價(jià)柱性能變化的參考。但要留意: 液相色譜柱柱性能可能由于所使用的樣品、活動(dòng)相、柱溫等條件的差異而有所不同;另外,在做柱性能測(cè)試時(shí)是按照色譜柱出廠報(bào)告中的條件進(jìn)行(出廠測(cè)試所使用的條件是*條件),只有這樣,測(cè)得的結(jié)果才有可比性。
 
  1、樣品的前處理:
 
  a、使用活動(dòng)相溶解樣品。
 
  b、使用予處理柱除往樣品中的強(qiáng)極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì)。
 
  c、使用0.45μm的過(guò)濾膜過(guò)濾除往微粒雜質(zhì)。
 
  2、活動(dòng)相的配制:
 
  液相色譜是樣品組分在柱填料與活動(dòng)相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的,因此要求活動(dòng)相具備以下的特點(diǎn):
 
  a、活動(dòng)相對(duì)樣品具有一定的溶解能力,保證樣品組分不會(huì)沉淀在柱中(或長(zhǎng)時(shí)間保存在柱中)。
 
  b、活動(dòng)相具有一定惰性,與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)(特殊情況除外)。
 
  c、活動(dòng)相的黏度要盡量小,以便在使用較長(zhǎng)的分析柱時(shí)能得到好的分離效果;同時(shí)降低柱壓降,延長(zhǎng)液體泵的使用壽命(可運(yùn)用進(jìn)步溫度的方法降低活動(dòng)相的黏度)。
 
  d、活動(dòng)相的物化性質(zhì)要與使用的檢測(cè)器相適應(yīng)。如使用UV檢測(cè)器,使用對(duì)紫外吸收較低的溶劑配制。
 
  e、活動(dòng)相沸點(diǎn)不要太低,否則輕易產(chǎn)生氣泡,導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)無(wú)法進(jìn)行。
 
  f、在活動(dòng)相配制好后,一定要進(jìn)行脫氣。除往溶解在活動(dòng)相中的微量氣體既有利于檢測(cè),還可以防止活動(dòng)相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。
 
  3、活動(dòng)相流速的選擇:
 
  因柱效是柱中活動(dòng)相線性流速的函數(shù),使用不同的流速可得到不同的柱效。對(duì)于一根特定的色譜柱,要追求*柱效,使用*流速。對(duì)內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱,流速一般選擇1ml/min,對(duì)于內(nèi)徑為4.0mm柱,流速0.8ml/min為佳。
 
  當(dāng)選用*流速時(shí),分析時(shí)間可能延長(zhǎng)。可采用改變活動(dòng)相的洗滌強(qiáng)度的方法以縮短分析時(shí)間(如使用反相柱時(shí),可適當(dāng)增加甲醇或乙腈的含量)。

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